我最近要做肌肉組織切片的ATP酶染色,可是總是染成全黑或是全是無色,請問是什么原因造成的,具體的解決辦法,或是誰有具體的染色步驟不吝賜教

熱心網友

你所描述的問題很可能是溶液的pH值的問題，染色的結果與pH密切相關，附區分骨骼肌纖維類型的ATP酶組織化學方法： 顯示肌球蛋白的ATP，肌纖維I、II型。 1。 組織固定于10%～15%中性福爾馬林。 2。 水洗后入0。88庶糖水溶液，或1%阿拉伯膠（100ml加30g庶糖）浸2～3d。 3。 冰凍切片10um，分別放入三種不同PH值的預孵育液內，室溫下10min。PH分別為10。4、4。65和4。3（準確）。 4。 入巴比妥鈉液（PH9。4）1min。 5。 入孵育液30min，37℃。 6。 2%氯化鈷（用前配制）3min 7。 蒸餾水洗3次1min/次 8。 1%硫化胺（用時配制）10min 9。 流水沖洗不少于10min。 10。 各級酒精脫水、透明、封片。 預孵育液： 1。 巴比妥鈉PH10。4，取巴比妥鈉4。12g，氯化鈉1。998g，加蒸餾水1000ml。 2。 醋酸緩沖液PH4。65，A液：醋酸鈉13。5g加蒸餾水至500ml。B液：冰醋酸6ml蒸餾水至500ml。取A液24ml，B液26ml混合至PH4。65。 3。 醋酸緩沖液PH4。3。用2液調PH至4。3。 孵育液： 取巴比妥鈉液（PH9。4）10ml加三磷酸腺甘鈉鹽20mg。 結果： PH值 纖 維 類 型 I IIA IIB IIC 10。4 灰或白 黑 黑 黑 4。65 黑 白 灰或黑 黑 4。3 黑 白 白或灰 深灰-----------------------------------------------巴比妥鈉能影響Ca2+-ATPase活性，對實驗最后一步硫化胺沉淀顯色很重要。另外，蔗糖溶液是為了保持更好的滲透壓，讓細胞原始形狀保持更好，PBS應該不如蔗糖好。