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動植物總RNA提取-Trizol法 Trizol法適用于人類、動物、植物、微生物的組織或培養細菌,樣品量從幾十毫克至幾克。用Trizol法提取的總RNA絕無蛋白和DNA污染。RNA可直接用于Northern斑點分析,斑點雜交, Poly(A)+分離,體外翻譯,RNase封阻分析和分子克隆。 1、將組織在液N中磨成粉末后,再以50-100mg組織加入1ml Trizol液研磨,注意樣品總體積不能超過所用Trizol體積的10%。 2、研磨液室溫放置5分鐘,然后以每1mlTrizol液加入0。2ml的比例加入氯仿,蓋緊離心管,用手劇烈搖蕩離心管15秒。 3、取上層水相于一新的離心管,按每mlTrizol液加0。5ml異丙醇的比例加入異丙醇,室溫放置10分鐘,12000g離心10分鐘。 4、棄去上清液,按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇,渦旋混勻,4℃下7500g離心5分鐘。 5、小心棄去上清液,然后室溫或真空干燥5-10分鐘,注意不要干燥過分,否則會降低RNA的溶解度。然后將RNA溶于水中,必要時可55℃-60℃水溶 10分鐘。RNA可進行mRNA分離,或貯存于70%乙醇并保存于-70℃。 [注意] 1、整個操作要帶口罩及一次性手套,并盡可能在低溫下操作。 2、加氯仿前的勻漿液可在-70℃保存一個月以上,RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周,-20℃保存一年。。