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RNAgents總RNA提取系統(tǒng) 1)Promega有哪些系統(tǒng)用于提取總RNA及poly(A)+RNA？2)RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)的工作原理怎樣？3)RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)的一般得率是多少？4)RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)的各組分的功能是什么？5)RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)中平衡的苯酚：氯仿：異戊醇的配比是多少？6...
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RNAgents總RNA提取系統(tǒng) 1)Promega有哪些系統(tǒng)用于提取總RNA及poly(A)+RNA？2)RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)的工作原理怎樣？3)RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)的一般得率是多少？4)RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)的各組分的功能是什么？5)RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)中平衡的苯酚：氯仿：異戊醇的配比是多少？6)對(duì)初始材料的用量有什么限制？7)提取RNA用作RT-PCR的方法作了哪些修改？--------------------------------------------------------------------------------1)Promega有哪些系統(tǒng)用于提取總RNA及poly(A)+RNA？Promega用于提取總RNA及poly(A)+RNA的系統(tǒng)包括：：用RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)從組織及培養(yǎng)的細(xì)胞中提取總RNA。：用SV總RNA提取系統(tǒng)從組織，血液及培養(yǎng)的細(xì)胞中提取總RNA。：用PolyATtract®mRNA提取系統(tǒng)從總RNA中提取poly(A)+RNA。：用PolyTtract®ystem1000從組織及培養(yǎng)的細(xì)胞中提取poly(A)+RNA。：用PolyTtract®Series 9600TMmRNA從少量樣品中快速提取mRNA（cDNA第一條鏈的純化）。2)RNAgents®提取總RNA提取系統(tǒng)的工作原理怎樣？RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)用溶劑法為基礎(chǔ)，從多種材料中快速，有效地提取總RNA。簡(jiǎn)單而言，有亞硫氫胍及巰基乙醇時(shí)，制組織勻漿，可使內(nèi)源的RNA酶失活，n-月桂肌氨酸將核蛋白復(fù)合物變性。用酸平衡的苯酚：氯仿：異戊醇抽提后，RNA脫離DNA及蛋白，從混合液中層析到水相。抽提后，用異丙醇將RNA沉淀濃縮。用RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)所得RNA純度好，用途廣，適用于PolyATtract®mRNA提取系統(tǒng)。如RNA中必須完全去除染色體DNA，需用1-2個(gè)單位的無(wú)RNA酶污染的DNA酶處理。然后用65oC加熱10分鐘，或用苯酚及氯仿抽提使DNA酶失活。3)RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)的一般得率是多少？得率受多個(gè)因素的影響，包括組織來(lái)源及培養(yǎng)的細(xì)胞數(shù)。如提取的RNA量多，可通過(guò)光吸收測(cè)定（A260讀數(shù)）來(lái)定量RNA， 1OD=40ugRNA。RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)的一般得率組織 總RNA得率Hela細(xì)胞 1.6mgRNA/10的8次方個(gè)細(xì)胞鼠內(nèi)臟 2.3mgRNA/g組織鼠脾 8.3mgRNA/g組織鼠肺 1.9mgRNA/g組織鼠腎 3.1mgRNA/g組織鼠肝 8.1mgRNA/g組織4)RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)的各組分的功能是什么？(1) 變性劑: 檸檬酸鈉溶液中含亞硫氫胍，巰基乙醇，n-月桂肌氨酸 ?？勺冃约?xì)胞內(nèi)及核蛋白復(fù)合物，釋放RNA。這些試劑還可有效抑制核酸酶。(2) 苯酚：氯仿：異戊醇（125：24：1）（pH4.7）:酸平衡苯仿可抽提去除雜物。DNA及蛋白沉淀到有機(jī)相，RNA留在水相。酸性有機(jī)溶劑的抽提可免除用氯化鋰選擇沉淀RNA。用鋰沉淀導(dǎo)致小于5.8sRNA的丟失，并不利于下游操作。(3) 乙酸鈉（pH4.0）：維持變性的細(xì)胞裂解液的pH值，及沉淀RNA所需。(4) 異丙醇：沉淀濃縮RNA。5)RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)中平衡的苯酚：氯仿：異戊醇的配比是多少？苯酚：氯仿：異戊醇的配比是125：24：1，用42mM檸檬酸鈉溶液平衡(pH4.3-4.7)。這一配比可有效去除染色體DNA。殘留染色體DNA會(huì)干擾RT-PCR。6)對(duì)初始材料的用量有什么限制？最初的設(shè)計(jì)方案是用作提取比較大量的RNA，RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)可從5mg 組織，或5倍10的5次方的細(xì)胞中提取RNA。少量RNA提取的步驟可見(jiàn)RNAgents®總RNA提取系統(tǒng)技術(shù)手冊(cè)TB087。初始材料用量的上限是每次用1g組織。7)提取RNA用作RT-PCR的方法作了哪些修改？快速提取RNA用作RT-PCR，可省去在變性溶液中液化和沉淀的步驟。簡(jiǎn)化的步驟可在90分鐘內(nèi)完成。
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